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酵母蛋白表達系統

酵母蛋白表達系統

Protein Expression in Yeast

畢赤酵母表達系統介紹

畢赤酵母(Pichia pastoris)表達系統是近年來發展迅速、應用廣泛的一種真核表達系統。它是甲醇營養型酵母菌,有兩個乙醇氧化酶(Alcohol oxidase, AOX)編碼基因AOX1和AOX2,兩種序列相似,AOX1基因嚴格受甲醇誘導和調控。當甲醇為唯一碳源時,AOX1啟動子可被甲醇誘導,啟動乙醇氧化酶的表達,從而用甲醇進行代謝,含AOX1啟動子的質粒可用來促進編碼外源蛋白的目的基因的表達。

表達菌株特點

GS115:AOX1和AOX2基因都正常表達AOX蛋白(乙醇氧化酶),甲醇的利用率高,接近于野生型,屬于甲醇快速利用型(Mut+)

KM71:AOX1基因被大部分剔除,只能利用AOX2為AOX編碼,甲醇的利用速率變慢,表現為甲醇慢利用型(Muts)

外源基因的整合方式不同會導致表達菌株的表型不同:

菌株表型

酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast

常用表達載體及篩選標記

載體信息

酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast


信號肽

對于胞外表達的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽,還有以下信號肽可供選擇:

信號肽序列

酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast

畢赤酵母表達系統的優勢

1. 含有特有的強有力的AOX(醇氧化酶基因)啟動子,用甲醇可嚴格地調控外源基因的表達。

2. 培養成本低,產物易分離,畢赤酵母所用發酵培養基成本合理,一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇,其余為無機鹽,培養基中不含蛋白,有利于下游產品分離純化。

3. 外源蛋白基因遺傳穩定,外源基因能以高拷貝數整合到畢赤酵母基因組中,不易丟失并能得到高表達菌株。

4. 作為真核表達系統,畢赤酵母具有真核生物的亞細胞結構,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。

艾柏森生物酵母表達系統的優勢

1. 具備完備的畢赤酵母表達平臺,可以根據蛋白特性或客戶的需求設計不同的實驗方案;

2. 具有高通量的篩選平臺,可以快速有效的得到最佳表達條件;

3. 具有大規模發酵生產能力

服務組合

酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast

經典案例

表達載體pPIC3.5K(胞內表達),目的蛋白32.49KD(理論值)

表達菌株:GS115/KM71

誘導條件:甲醇濃度0.5%/1%,誘導時間24h/48/72h

結果分析:從SDS-PAGE膠圖中可以看到,目的蛋白(糖基化后40KDa左右)有明顯表達,其中GS115-5#-24h,0.5%甲醇,GS115-2#-48h,1%甲醇,GS115-3#-48h,01%甲醇,KM71-1#-72h,1%甲醇,都有很明顯的目的條帶,目的蛋白成功表達。


酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast


酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast



酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast


酵母蛋白表達系統;Protein Expression in Yeast

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